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塞姆利基森林病毒PCR檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介

塞姆利基森林病毒PCR檢測試劑盒說明書
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
LLO檢測試劑盒 主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):862
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組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

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 產(chǎn)品名稱

 塞姆利基森林病毒PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Semliki Forest Virus(SFV)RTPCR

 貨號

 LZP7287

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Schisanlactone E脫落酸(天然) 98%2-溴苯乙烯 97%,含0.1%對叔丁基鄰苯二酚(TBC)穩(wěn)定劑

Sculponeatic acid脫落酸(天然) 95%4-羥基苯甲酸苯甲酯 99%

Scutellaric acid脫落酸(天然) 90%4-溴丁酰氯 95%

Sebiferenic acid羥甲硝咪唑-同位素 分析標準品4-溴肉桂酸 98%

Secaubryel對甲酸甲酯 99%4-氯肉桂酸 99%

Secaubrytriol鄰 98%肉桂酰胺 97%

Semialactone赤霉素  >90% (HPLC)甲酸肉桂酯 92%

Sendalactone赤霉素  ≥96% (HPLC)咖啡酸苯乙酯 97%

Senegalide赤霉素 分析標準品鹽酸可樂定 98%

Senegenin赤霉素 植物細胞培養(yǎng)級,≥96% (HPLC)頭孢呋辛鈉 分析標準品

Serratenediol6-芐氨基嘌呤 99%肉桂基氯 95%

Serratenediol diacetate4-溴吲哚 98%0.98

Serratriol乙烯利  >90.0%(HPLC)α-氯代肉桂 97%

Shione乙烯利 80%頭孢噻肟鈉 ≥99.5%(HPLC)

Shoreic acid乙烯利 分析標準品氯貝特 98%

Siameside I增甘膦 分析標準品頭孢拉定

對二甲氧基苯(>98%,BR)MSH2 (D24B5) XP® Rabbit mAbphospho-MEK5(Ser311+Thr315)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體

1,5-二氨基萘(>98%,BR)MEP50 (D56B8) Rabbit mAbphospho-MEK5(Ser142)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體

1,5-二羥基萘(>97%,BR)Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IF preferred)phospho-MEK5(Ser137)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體

1,6-二羥基萘(>98%,BR)Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IF preferred)phospho-MEK5(Ser129)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體

1,8-辛二(>98%,BR)FoxD3 (D20A9) Rabbit mAbphospho-MEK3(Thr222)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶3抗體

1-萘乙酮(>95%,BR)Cripto Antibody (Human Specific)phospho-MEK2(Tyr78)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體

1-溴金剛烷(>99%,BR)Hexokinase I (C35C4) Rabbit mAbphospho-MEK2(Thr394)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體

烯基硫脲(>98%,BR)Hexokinase I (C35C4) Rabbit mAbphospho-MEK2(Ser226)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體

1-溴3-氯烷(>97%,BR)Miwi (D478) Antibodyphospho-MEK1+MEK2(Ser222/Ser226)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體

溴代庚烷(>98%,BR)IRF-5 Antibodyphospho-MEK1/MAPKK1(Ser298)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體
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